Вектор (молекулярная биология): различия между версиями

[непроверенная версия][отпатрулированная версия]
Содержимое удалено Содержимое добавлено
Спасено источников — 1, отмечено мёртвыми — 0. Сообщить об ошибке. См. FAQ. #IABot (v2.0beta14)
Нет описания правки
Строка 1:
{{Другие значения|Вектор}}
{{не путать|Переносчик|вектором (переносчиком) в эпидемиологии}}
'''Вектор''' (''в генетике'') — молекула нуклеиновой кислоты, чаще всего [[Дезоксирибонуклеиновая кислота|ДНК]], используемая в [[Генетическая инженерия|генетической инженерии]] для передачи генетического материала внутрь клетки, в том числе в клетку живого многоклеточного организма ''[[in vivo]]''<ref>См. [[:en:Viralвирусные vectorвекторы]].</ref>.
 
Существующие векторы:
Строка 7:
* [[фазмиды]]
* векторы на основе вируса [[SV40]]
* векторы на основе [[аденовирусАденовирусы|аденовирусов]]ов
* векторы на основе [[герпесвирусГерпесвирусы|герпесвирусов]]ов
* векторы на основе [[ретровирусРетровирусы|ретровирусов]]ов
* векторы на основе [[аденоассоциированный вирус|аденоассоциированного вируса]]
 
== Пример клонирования ДНК ==
[[Файл:PBR322 plasmid.gif|thumb|Рис. 1. Карта плазмиды pBR 322]]
[[Файл:DNA_CloningDNA Cloning.png|thumb|Рис. 2. Взаимодействие плазмиды с чужеродной ДНК]]
В качестве примера рассмотрим процесс [[Клонирование ДНК|клонирования]] участка чужеродной [[ДНК]] бактерией ''[[E. coli]]'' при помощи [[плазмида|плазмиды]] [[pBR322]]<ref name="Regular-polytopes">
Весь материал данного раздела, кроме абзацев, где источники указаны особо, взят из книги {{книга
|автор = Айала Ф., Кайгер Дж.
Строка 23:
|место = М.
|издательство = Мир
|год = 1987
|том = 1
|allpages = 295
|страницы =
|серия =
|isbn =
}}</ref>.
</ref>.
 
[[pBR322]] — искусственная плазмида, созданная Франциско Боливаром и Раймондом Родригесом с целью клонирования генетического материала. Она представляет собой циклический фрагмент ДНК длиной 4361 [[нуклеотид]]ных пары (рис. 1). Плазмида содержит [[ген]] устойчивости к [[тетрациклин]]у ''tet'', взятый из естественной плазмиды pSC 101; ген устойчивости к [[ампициллин]]у ''amp'', взятый из [[транспозон]]а Tn3; и участок начала [[репликацияРепликация ДНК|репликации]] ''ori'', заимствованный из плазмиды pMB 1. Тетрациклин и ампициллин — сильные [[антибиотик]]и. Наличие в плазмиде генов устойчивости к ним (активных или блокированных) играет существенную роль в выделении бактерий со встроенным участком чужеродной ДНК. Плазмида содержит также [[Сайт рестрикции|сайты рестрикции]] Pst I, ''Bam'' HI и ''Sal'' I, причём первый находится в гене amp, а два остальных — в гене tet. Это важное обстоятельство помогает модифицировать плазмиду.
 
Предположим, что в плазмиду необходимо встроить фрагмент, который ранее был вырезан из другой ДНК [[рестриктаза|рестриктазой]] ''Bam'' HI (то есть он имеет на концах последовательность нуклеотидов, характерную для сайта рестрикции ''Bam'' HI). Для этого плазмиды обрабатываются рестриктазой ''Bam'' HI, (которая разрежет кольцевую молекулу в сайте рестрикции и образует линейный участок ДНК) и добавляются участки чужеродной ДНК. Поскольку на концах всех фрагментов ДНК находятся комплементарные последовательности нуклеотидов, они начнут «склеиваться», причём возможны два варианта склейки (рис. 2) :
Строка 39 ⟶ 38 :
 
Поскольку плазмиды со встроенным фрагментом являются целью процесса, необходимо выделить такие плазмиды и клонировать их. Процесс идёт следующим образом:
# Плазмиды внедряются в клетки ''E. coli''. Для этого клетки обрабатываются [[ион]]ами Ca<sup>2+</sup>, что делает их [[Клеточная мембрана|мембраны]] проницаемыми для ДНК.
# Полученные бактерии высевают на среду, содержащую ампициллин. В этой среде нормально растут колонии бактерий, содержащие плазмиды, остальные колонии угнетаются. По этому признаку можно отличить бактерии, содержащие плазмиды;
# Колонии, содержащие плазмиды, перепечатываются на среду, содержащую тетрациклин. Поскольку чужеродная ДНК вклинивается внутрь гена ''tet'', дезактивируя его, колонии бактерий с модифицированными плазмидами угнетаются тетрациклином. Таким образом они визуально отличимы от колоний бактерий с восстановленными плазмидами.
Строка 50 ⟶ 49 :
 
== Ссылки ==
* [https://web.archive.org/web/20090101113833/http://homepages.strath.ac.uk/%7Edfs99109~dfs99109/BB211/InsertInactnotes.html Recombinant DNA technology: Selective subcloning techniques].
 
{{Внешние ссылки}}
{{Нуклеиновые кислоты}}
{{mol_bioMol-bio-stub}}
 
{{mol_bio-stub}}
 
[[Категория:Методы молекулярной биологии]]