Протеомика: различия между версиями

[отпатрулированная версия][отпатрулированная версия]
Содержимое удалено Содержимое добавлено
Строка 40:
 
[[Файл:Electrospray Ionization Spectroscopy.svg|thumb|Схема ионизации электроспреем. (1) Под действием высокого напряжения из капилляра выходит струя капель жидкости (аэрозоль). (2) Растворитель в аэрозоле испаряется, заряд начинает переходить на исследуемые молекулы. (3) От капли остаётся скопление заряженных ионов]]
В качестве альтернативы MALDI ионизацию пептидов перед масс-спектрометрией можно осуществлять с помощью метода ионизации электрораспылением, или ионизации [[Электроспрей|электроспреем]] ({{lang-en|electrospray ionisation, ESI}}). Жидкость, содержащая исследуемые белки, помещается в конический капилляр, и, когда она выходит из капилляра, к ней прилагается сильное [[Напряжение (электрическое)|напряжение]]. В результате жидкость превращается в аэрозоль, и при испарении частиц их аэрозоля в потоке инертного газа заряд может переходить на растворённые в аэрозоле [[биомолекулы]], в том числе белки. При таком способе ионизации биомолекулы не разрушаются. Ионизацию электроспреем можно легко совместить с [[Высокоэффективная жидкостная хроматография|высокоэффективной жидкостной хроматографией]]: поток хроматографической фазы с колонки можно направить прямо в капилляр для электрораспыления. Таким образом, масс-спектрометр будет определять массы разделяемых в аналитической колонке молекул. Этот метод обозначают аббревиатурой LC-MS (от англ. {{lang-en|liquid chromatography-mass spectrometry}})<ref>{{cite pmid|19224008}}</ref>. Идентификация белков в сложном растворе при помощи комбинации масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии получила название протеомики-дробовика, или скорострельной протеомики ({{lang-en|shotgun proteomics}})<ref>{{cite pmid|17990506}}</ref>.
 
Методы масс-спектрометрии могут быть использованы для направленного обнаружения искомых белков, то есть масс-спектрометр можно настроить таким образом, чтобы он видел только нужный пептид. Для этой цели используют {{нп5|Масс-спектрометр с тройным квадруполем|прибор с детектором типа тройного квадруполя|en|Triple quadrupole mass spectrometer}}, то есть три одинаковых масс-спектрометра, последовательно передающие друг другу ионы. Первый масс-спектрометр отфильтровывает интересующий пептид, во втором он фрагментируется, а третий регистрирует от 3 до 5 заранее выбранных фрагментов. Количественный анализ производится на основе интенсивности фрагментов. Этот метод называется мониторинг множественных реакций ({{lang-en|multiple reaction monitoring, MRM}}), или {{нп5|мониторинг выбранных реакций||en|Selected reaction monitoring}} ({{lang-en|selected reaction monitoring, SRM}})<ref>{{cite doi|10.1074/mcp.M500331-MCP200}}</ref>.