Vicia test
Vicia test («Вициа тест») — растительная тест-система, которая используется в генотоксикологических исследованиях различных факторов. Один из 9 главных растительных цитогенетических тестов, рекомендованных Международной программой Gene-Tox и Всемирной Организацией Здравоохранения. В данном тесте объектом исследования являются клетки корневых меристем Vicia faba L. (боб садовый). В настоящее время это один из наиболее распространённых в мире цитогенетических тестов[1][2][3].
Характеристика метода править
Применение править
С середины 20-го века клетки корневых меристем Vicia faba стали пользоваться популярностью у генетиков и морфологов как удобная цитогенетическая модель. Это связано с рядом характеристик генома Vicia faba:
- небольшие размеры хромосом
- малое число хромосом
- высокая степень конденсации хроматина, что позволяет отчетливо наблюдать все фазы митоза.
Наиболее часто Vicia test используют для мониторинга мутагенной активности воды и почвы природного и антропогенного происхождения. Тест применяют и при исследовании генетической безопасности пищевых добавок, пестицидов, наночастиц, радиации и многих других факторов[1].
Специфика править
При изучении мутагенного эффекта различных факторов в Vicia test используют два стандартных и универсальных генетических анализа: ана-телофазный анализ хромосомных аберраций и микроядерный тест (который наиболее распространен). Кроме того, на меристемах Vicia faba можно изучать динамику митотической активности[2][1].
Постановка эксперимента править
Для опытов используют выборки бобов из одного урожая. Семена 5 дней проращивают при комнатной температуре в чашках Петри с фильтровальной бумагой или ватой, смоченной дистиллированной водой. При достижении корешками 5 мм удаляют кончик, чтобы стимулировать рост вторичных корешков. В конце эксперимента отбираются только три наиболее крупных проростка, и у каждого измеряется длина трех наиболее длинных вторичных корешков. Затем корешки срезаются и фиксируются с помощью фиксатора Кларка (1 часть ледяной уксусной кислоты: 3 части 96 % (100 %) этилового спирта). Окраску меристем проводят 1 % ацетоорсеином (перед окраской можно провести мацерирование 1 М HCl при 600 на 6 мин.) Готовят давленные препараты. Для установления частоты микроядер на каждом препарате исследуют 1000 интерфаз. Всего на каждую группу готовят 6 препаратов. Для оценки митотической активности на препарате анализируют 1000 делящихся клеток на всех фазах митоза[1].
Статистика править
Используют непараметрический критерий Манна — Уитни, а затем тест Краскела — Уоллиса.
См. также править
Примечания править
- ↑ 1 2 3 4 Anne-Sophie Foltête, Adrien Dhyèvre, Jean-François Férard, Sylvie Cotelle. Improvement of Vicia-micronucleus test for assessment of soil quality: A proposal for international standardization (англ.). — Chemosphere, 2011. — P. 1624-1629. — doi:10.1016/j.chemosphere.2011.08.026. — PMID 21906776.
- ↑ 1 2 Ma T.H. Vicia cytogenetic tests for environmental mutagens. A report of the U.S. Environmental Protection Agency Gene-Tox Program (англ.). — Mutation research, 1982. — P. 257-271. — doi:10.1016/0165-1110(82)90045-8. — PMID 7177153.
- ↑ ВОЗ. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. — Женева: ВОЗ, 1989. — С. 189. Архивировано 17 октября 2023 года.