LifeAct — это специфический краситель, который связывается и окрашивает филаменты актина (F-актин) в эукариотических клетках. Он представляет собой рекомбинантный белок состоящий из 17 аминокислотных остатков актин-связывающего белка Abp 140 генетически объединённых с флуоресцентным белком.
Краситель является зарегистрированным товарным знаком компании ibidi GmbH[1] . Существует несколько вариантов красителя, которые используются в зависимости от типа клеток, метода и цели анализа.
Варианты
править- LifeAct плазмида
- LifeAct мРНК
- LifeAct аденовирус
- LifeAct лентивирус
- LifeAct белок
Принцип действия
правитьLifeAct состоит из двух частей[2]. Это часть представляющая собой первые 17 аминокислот актин-связывающего белка Abp 140 из пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae) благодаря которой LifeAct распознаёт и связывается с филаментами актина. И часть представляющая собой флуоресцентный маркер — зелёный флуоресцентный белок (ЗФБ) из медузы Aequorea victoria, или красный флуоресцентный белок (КФБ) из кораллов Discosoma с помощью которой можно детектировать краситель под микроскопом. Эти две части генетически объединены друг с другом. Ген LifeAct вводится в исследуемые эукариотические клетки методом трансфекции (используя LifeAct плазмиду) или трансдукции (используя LifeAct аденовирус или LifeAct лентивирус) и затем гибридный белок LifeAct эспрессируется в клетках. Он связывается с филаментами актина живых или фиксированных клеток, и флуоресцирует, что позволяет визуализировать клеточную динамику под микроскопом. Клетки синтезируют LifeAct за короткий промежуток времени, что делает его хорошим маркером in vivo.
Применения в биомедицинских исследованиях
правитьКрасители LifeAct широко используются в качестве маркеров для визуализации F-актина в биологических исследованиях. Например, LifeAct использовали для визуализации миграции пограничных клеток в яичниках мух Drosophila, чтобы определить, как клетки перемещаются во время эмбрионального развития и рака[3]. Также LifeAct применяли в исследованиях касающихся деградации актинового цитоскелета в ходе старения и визуализировали пространственную организацию цитоскелета как функцию возраста. Для этих опытов использовали трансгенные линии, которые экспрессировали краситель LifeAct в различных тканях нематод C. Elegans[4].
Примечания
править- ↑ ibidi – cells in focus. ibidi.com. Дата обращения: 3 мая 2020. Архивировано 7 мая 2020 года.
- ↑ Julia Riedl, Alvaro H Crevenna, Kai Kessenbrock, Jerry Haochen Yu, Dorothee Neukirchen. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin // Nature Methods. — 2008-06-08. — Т. 5, вып. 7. — С. 605–607. — ISSN 1548-7105 1548-7091, 1548-7105. — doi:10.1038/nmeth.1220.
- ↑ Ketki Sawant, Yujun Chen, Nirupama Kotian, Kevin M. Preuss, Jocelyn A. McDonald. Rap1 GTPase promotes coordinated collective cell migration in vivo // Molecular Biology of the Cell. — 2018-11. — Т. 29, вып. 22. — С. 2656–2673. — ISSN 1939-4586 1059-1524, 1939-4586. — doi:10.1091/mbc.e17-12-0752.
- ↑ Ryo Higuchi-Sanabria, Joseph W. Paul, Jenni Durieux, Camila Benitez, Phillip A. Frankino. Spatial regulation of the actin cytoskeleton by HSF-1 during aging // Molecular Biology of the Cell. — 2018-10-15. — Т. 29, вып. 21. — С. 2522–2527. — ISSN 1939-4586 1059-1524, 1939-4586. — doi:10.1091/mbc.e18-06-0362.
На эту статью не ссылаются другие статьи Википедии. |